Недеља, КСНУМКС јануар КСНУМКС КСНУМКС: КСНУМКС

Ин витро испитивање токсичности

Оцените овај артикал
(КСНУМКС гласова)

Појава софистицираних технологија у молекуларној и ћелијској биологији подстакла је релативно брзу еволуцију у наукама о животу, укључујући токсикологију. У ствари, фокус токсикологије се помера са целих животиња и популације целих животиња на ћелије и молекуле појединачних животиња и људи. Од средине 1980-их, токсиколози су почели да користе ове нове методологије у процени ефеката хемикалија на живе системе. Као логичан напредак, такве методе се прилагођавају за потребе испитивања токсичности. Ова научна достигнућа су радила заједно са друштвеним и економским факторима како би утицала на промену у процени безбедности производа и потенцијалног ризика.

Економски фактори су посебно повезани са запремином материјала који се мора тестирати. Сваке године на тржиште се уводи мноштво нових козметичких, фармацеутских, пестицида, хемикалија и производа за домаћинство. Сви ови производи морају бити процењени на њихову потенцијалну токсичност. Поред тога, постоји заостатак хемикалија које су већ у употреби које нису адекватно тестиране. Огроман задатак добијања детаљних безбедносних информација о свим овим хемикалијама коришћењем традиционалних метода испитивања целих животиња био би скуп и у смислу новца и времена, ако би уопште могао да се оствари.

Постоје и друштвена питања која се односе на јавно здравље и безбедност, као и све већа забринутост јавности у вези са употребом животиња за тестирање безбедности производа. Што се тиче безбедности људи, групе за јавни интерес и заштиту животне средине извршиле су значајан притисак на владине агенције да примењују строже прописе о хемикалијама. Недавни пример овога је покрет неких еколошких група за забрану хлора и једињења која садрже хлор у Сједињеним Државама. Једна од мотивација за тако екстремну акцију лежи у чињеници да већина ових једињења никада није била адекватно испитана. Из токсиколошке перспективе, концепт забране читаве класе различитих хемикалија заснованих само на присуству хлора је и научно неисправан и неодговоран. Ипак, разумљиво је да из перспективе јавности мора постојати извесна гаранција да хемикалије које се испуштају у животну средину не представљају значајан ризик по здравље. Таква ситуација наглашава потребу за ефикаснијим и бржим методама за процену токсичности.

Друга друштвена брига која је утицала на област испитивања токсичности је добробит животиња. Све већи број група за заштиту животиња широм света изразио је значајно противљење употреби целих животиња за тестирање безбедности производа. Активне кампање вођене су против произвођача козметике, производа за домаћинство и личну негу и фармацеутских производа у покушају да се зауставе тестирање на животињама. Такви напори у Европи су резултирали усвајањем Шестог амандмана на Директиву 76/768/ЕЕЦ (Директива о козметици). Последица ове Директиве је да се козметички производи или козметички састојци који су тестирани на животињама после 1. јануара 1998. године не могу пласирати на тржиште Европске уније, осим ако алтернативне методе нису довољно валидиране. Иако ова Директива нема надлежност над продајом таквих производа у Сједињеним Државама или другим земљама, она ће значајно утицати на компаније које имају међународна тржишта која укључују Европу.

Концепт алтернатива, који чини основу за развој тестова, осим оних на целим животињама, дефинисан је са три Rs: Смањење у броју коришћених животиња; пречишћавање протокола тако да животиње доживљавају мање стреса или нелагодности; и замена актуелних тестова на животињама са ин витро тестовима (тј. тестовима који се раде ван живих животиња), компјутерским моделима или тестовима на нижим врстама кичмењака или бескичмењака. Три Rсу представљени у књизи коју су 1959. објавила два британска научника, ВМС Русселл и Рек Бурцх, Принципи хумане експерименталне технике. Расел и Бурч су сматрали да је једини начин на који се могу добити валидни научни резултати кроз хуман третман према животињама и веровали су да треба развити методе како би се смањила употреба животиња и на крају је заменила. Занимљиво је да су принципи које су изнели Расел и Бурч добили мало пажње све до поновног оживљавања покрета за добробит животиња средином 1970-их. Данас концепт троје Rс је веома у првом плану у погледу истраживања, тестирања и образовања.

Укратко, на развој методологија ин витро тестирања утицали су различити фактори који су се приближили током последњих десет до 20 година. Тешко је утврдити да ли би било који од ових фактора сам по себи имао тако дубок утицај на стратегије испитивања токсичности.

Концепт ин витро тестова токсичности

Овај одељак ће се фокусирати искључиво на ин витро методе за процену токсичности, као једну од алтернатива тестирању на целим животињама. Додатне не-животињске алтернативе, као што су компјутерско моделирање и квантитативни односи структуре и активности, разматрају се у другим чланцима овог поглавља.

Ин витро студије се генерално спроводе на животињским или људским ћелијама или ткивима ван тела. Ин витро буквално значи „у стаклу“ и односи се на поступке који се спроводе на живом материјалу или компонентама живог материјала узгајаног у петријевим посудама или у епруветама под дефинисаним условима. Ово се може супротставити студијама ин виво или онима које су спроведене „на живим животињама“. Иако је тешко, ако не и немогуће, пројектовати ефекте хемикалије на сложени организам када су посматрања ограничена на једну врсту ћелија у посуди, ин витро студије такође пружају значајну количину информација о интринзичној токсичности. као ћелијски и молекуларни механизми токсичности. Поред тога, оне нуде многе предности у односу на ин виво студије у томе што су генерално јефтиније и могу се спроводити под више контролисаним условима. Штавише, упркос чињеници да је још увек потребан мали број животиња за добијање ћелија за ин витро културе, ове методе се могу сматрати алтернативама редукције (пошто се користи много мање животиња у поређењу са ин виво студијама) и алтернативама за пречишћавање (јер елиминишу потребу подвргавање животиња штетним токсичним последицама које намећу експерименти ин виво).

Да би се интерпретирали резултати испитивања токсичности ин витро, утврдила њихова потенцијална корисност у процени токсичности и повезали их са укупним токсиколошким процесом ин виво, неопходно је разумети који део токсиколошког процеса се испитује. Цео токсиколошки процес састоји се од догађаја који почињу излагањем организма физичком или хемијском агенсу, напредују кроз ћелијске и молекуларне интеракције и на крају се манифестују у одговору целог организма. Ин витро тестови су генерално ограничени на део токсиколошког процеса који се одвија на ћелијском и молекуларном нивоу. Типови информација које се могу добити из ин витро студија укључују путеве метаболизма, интеракцију активних метаболита са ћелијским и молекуларним циљевима и потенцијално мерљиве токсичне крајње тачке које могу послужити као молекуларни биомаркери за излагање. У идеалној ситуацији, механизам токсичности сваке хемикалије од излагања до манифестације организма био би познат, тако да би се информације добијене ин витро тестовима могле у потпуности тумачити и повезати са одговором целог организма. Међутим, то је практично немогуће, пошто је релативно мало комплетних токсиколошких механизама разјашњено. Дакле, токсиколози су суочени са ситуацијом у којој се резултати ин витро теста не могу користити као потпуно тачно предвиђање ин виво токсичности јер је механизам непознат. Међутим, често се током процеса развоја ин витро теста разјашњавају компоненте ћелијског и молекуларног механизма(а) токсичности.

Једно од кључних нерешених питања у вези са развојем и имплементацијом ин витро тестова односи се на следеће разматрање: да ли они морају бити механички засновани или је довољно да буду дескриптивни? Из научне перспективе несумњиво је боље користити само механичке тестове као замену за ин виво тестове. Међутим, у недостатку потпуног механистичког знања, изгледи за развој ин витро тестова који би у потпуности заменили тестове на животињама у блиској будућности су скоро никакви. Ово, међутим, не искључује употребу дескриптивнијих типова тестова као раних алата за скрининг, што је тренутно случај. Ови екрани су довели до значајног смањења употребе животиња. Стога, све док се не генерише више механичких информација, можда ће бити неопходно применити у ограниченој мери тестове чији резултати једноставно добро корелирају са онима добијеним ин виво.

Ин витро тестови за цитотоксичност

У овом одељку биће описано неколико ин витро тестова који су развијени за процену цитотоксичног потенцијала хемикалије. Углавном, ови тестови су лаки за извођење и анализа се може аутоматизовати. Један који се обично користи ин витро тест за цитотоксичност је неутрални црвени тест. Овај тест се ради на ћелијама у култури, а за већину примена, ћелије се могу одржавати у посудама за културу које садрже 96 малих бунара, сваки пречника 6.4 мм. Пошто сваки бунар може да се користи за једно одређивање, овај распоред може да прихвати више концентрација испитиване хемикалије, као и позитивне и негативне контроле са довољним бројем понављања за сваку. Након третмана ћелија различитим концентрацијама испитиване хемикалије у распону од најмање два реда величине (нпр. од 0.01 мМ до 1 мМ), као и хемикалијама позитивне и негативне контроле, ћелије се испиру и третирају неутралном црвеном бојом, а боја коју могу да усвоје и задрже само живе ћелије. Боја се може додати након уклањања испитиване хемикалије да би се одредили непосредни ефекти, или се може додати у различито време након уклањања испитиване хемикалије да би се одредили кумулативни или одложени ефекти. Интензитет боје у сваком бунарчићу одговара броју живих ћелија у том бунарчићу. Интензитет боје се мери спектрофотометром који може бити опремљен читачем плоча. Читач плоча је програмиран да обезбеди појединачна мерења за сваки од 96 бунарчића посуде за културу. Ова аутоматизована методологија дозвољава истраживачу да брзо изведе експеримент концентрације и одговора и да добије статистички корисне податке.

Још један релативно једноставан тест за цитотоксичност је МТТ тест. МТТ (3[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолијум бромид) је тетразолијумова боја коју митохондријски ензими редукују у плаву боју. Само ћелије са одрживим митохондријама ће задржати способност да спроведу ову реакцију; стога је интензитет боје директно повезан са степеном интегритета митохондрија. Ово је користан тест за откривање општих цитотоксичних једињења, као и оних агенаса који специфично циљају митохондрије.

Мерење активности лактат дехидрогеназе (ЛДХ) се такође користи као тест широког спектра цитотоксичности. Овај ензим је нормално присутан у цитоплазми живих ћелија и ослобађа се у медијум ћелијске културе кроз ћелијске мембране мртвих или умирућих ћелија које су биле штетно погођене токсичним агенсом. Мале количине медијума за културу могу се уклонити у различитим временима након хемијског третмана ћелија да би се измерила количина ослобођеног ЛДХ и одредио временски ток токсичности. Иако је тест ослобађања ЛДХ веома општа процена цитотоксичности, он је користан јер се лако изводи и може се урадити у реалном времену.

Постоји много нових метода које се развијају за откривање оштећења ћелија. Софистицираније методе користе флуоресцентне сонде за мерење различитих интрацелуларних параметара, као што су ослобађање калцијума и промене пХ и мембранског потенцијала. Генерално, ове сонде су веома осетљиве и могу открити суптилније ћелијске промене, чиме се смањује потреба за коришћењем ћелијске смрти као крајње тачке. Поред тога, многи од ових флуоресцентних тестова могу бити аутоматизовани коришћењем плоча са 96 јажица и читача флуоресцентних плоча.

Када се прикупе подаци о низу хемикалија помоћу једног од ових тестова, може се одредити релативна токсичност. Релативна токсичност хемикалије, утврђена ин витро тестом, може се изразити као концентрација која има 50% ефекта на одговор крајње тачке нетретираних ћелија. Ова одлука се назива ЕК50 (Eефективно Cконцентрација за 50% ћелија) и може се користити за поређење токсичности различитих хемикалија ин витро. (Сличан термин који се користи у процени релативне токсичности је ИЦ50, што указује на концентрацију хемикалије која изазива 50% инхибицију ћелијског процеса, нпр. способност да преузме неутрално црвено.) Није лако проценити да ли је релативна ин витро токсичност хемикалија упоредива са њиховом релативном у виво токсичности, пошто постоји толико збуњујућих фактора у систему ин виво, као што су токсикокинетика, метаболизам, поправка и одбрамбени механизми. Поред тога, пошто већина ових тестова мери опште крајње тачке цитотоксичности, они нису механички засновани. Стога је слагање између ин витро и ин виво релативне токсичности једноставно корелативно. Упркос бројним сложеностима и потешкоћама у екстраполацији са ин витро на ин виво, ови ин витро тестови су се показали веома вредним јер су једноставни и јефтини за извођење и могу се користити као екрани за означавање високо токсичних лекова или хемикалија у раним фазама развој.

Токсичност циљног органа

Ин витро тестови се такође могу користити за процену специфичне токсичности циљног органа. Постоје бројне потешкоће повезане са дизајнирањем таквих тестова, од којих је најзначајнија неспособност ин витро система да одрже многе карактеристике органа ин виво. Често, када се ћелије узму од животиња и ставе у културу, оне имају тенденцију или да брзо дегенеришу и/или да се дедиференцирају, односно изгубе своје функције сличне органу и постану генеричке. Ово представља проблем јер у кратком временском периоду, обично неколико дана, културе више нису корисне за процену ефеката токсина специфичних за органе.

Многи од ових проблема се превазилазе због недавног напретка у молекуларној и ћелијској биологији. Информације које се добију о ћелијском окружењу ин виво могу се користити за модулацију услова културе ин витро. Од средине 1980-их, откривени су нови фактори раста и цитокини, а многи од њих су сада доступни комерцијално. Додавање ових фактора ћелијама у култури помаже у очувању њиховог интегритета и такође може помоћи да се задрже више диференциране функције током дужег временског периода. Друге основне студије су повећале знање о нутритивним и хормонским потребама ћелија у култури, тако да се могу формулисати нови медији. Недавни напредак је такође постигнут у идентификацији природних и вештачких екстрацелуларних матрица на којима се ћелије могу узгајати. Култура ћелија на овим различитим матрицама може имати дубоке ефекте и на њихову структуру и на функцију. Главна предност која произилази из овог знања је способност да се замршено контролише окружење ћелија у култури и појединачно испитају ефекти ових фактора на основне ћелијске процесе и на њихове одговоре на различите хемијске агенсе. Укратко, ови системи могу пружити сјајан увид у механизме токсичности специфичне за органе.

Многе студије токсичности за циљне органе спроводе се у примарним ћелијама, које су по дефиницији свеже изоловане из органа и обично показују ограничен животни век у култури. Постоје многе предности поседовања примарних култура једног типа ћелије из органа за процену токсичности. Из механичке перспективе, такве културе су корисне за проучавање специфичних ћелијских циљева хемикалије. У неким случајевима, два или више типова ћелија из органа могу се култивисати заједно, а ово пружа додатну предност у могућности да се посматрају интеракције ћелија-ћелија као одговор на токсин. Неки системи ко-културе за кожу су конструисани тако да формирају тродимензионалну структуру која личи на кожу ин виво. Такође је могуће заједно култивисати ћелије из различитих органа — на пример, јетре и бубрега. Ова врста културе би била корисна у процени ефеката специфичних за ћелије бубрега, хемикалије која се мора биоактивирати у јетри.

Молекуларно биолошки алати су такође играли важну улогу у развоју континуираних ћелијских линија које могу бити корисне за испитивање токсичности циљних органа. Ове ћелијске линије се генеришу трансфекцијом ДНК у примарне ћелије. У поступку трансфекције, ћелије и ДНК се третирају тако да ДНК могу да преузму ћелије. ДНК је обично од вируса и садржи ген или гене који, када се експримирају, омогућавају ћелијама да постану овековечене (тј. способне да живе и расту у дужем временском периоду у култури). ДНК се такође може конструисати тако да бесмртни ген контролише индуцибилни промотер. Предност ове врсте конструкта је у томе што ће се ћелије поделити само када добију одговарајући хемијски стимуланс који омогућава експресију бесмртног гена. Пример таквог конструкта је велики ген Т антигена из Симиан вируса 40 (СВ40) (ген за бесмртност), коме претходи промоторски регион металотионеинског гена, који је индукован присуством метала у медијуму културе. Дакле, након што је ген трансфектован у ћелије, ћелије се могу третирати ниским концентрацијама цинка да би се стимулисао МТ промотор и укључила експресија гена Т антигена. У овим условима, ћелије се размножавају. Када се цинк уклони из медијума, ћелије престају да се деле и под идеалним условима се враћају у стање у коме изражавају своје функције специфичне за ткиво.

Способност стварања бесмртних ћелија у комбинацији са напретком у технологији ћелијске културе у великој мери је допринела стварању ћелијских линија из многих различитих органа, укључујући мозак, бубреге и јетру. Међутим, пре него што се ове ћелијске линије могу користити као сурогат за веродостојне типове ћелија, морају се пажљиво окарактерисати да би се утврдило колико су „нормалне“ заиста.

Други ин витро системи за проучавање токсичности циљних органа укључују све већу сложеност. Како ин витро системи напредују у сложености од једне ћелије до културе целог органа, они постају све упоредивији са ин виво миљеом, али у исто време постају много тежи за контролу с обзиром на повећан број варијабли. Стога, оно што се може добити преласком на виши ниво организације може се изгубити у неспособности истраживача да контролише експериментално окружење. Табела 1 упоређује неке од карактеристика различитих ин витро система који су коришћени за проучавање хепатотоксичности.

Табела 1. Поређење ин витро система за студије хепатотоксичности

Систем Сложеност
(ниво интеракције)
Способност задржавања функција специфичних за јетру Потенцијално трајање културе Способност контроле околине
Овековечене ћелијске линије од ћелије до ћелије (зависи од ћелијске линије) лоше до добро (зависи од ћелијске линије) неодређен одличан
Примарне културе хепатоцита ћелија до ћелије поштено до одлично (зависи од услова културе) дана до недеља одличан
Кокултуре ћелија јетре ћелија у ћелију (између истих и различитих типова ћелија) добро до сјајног недеља одличан
Кришке јетре од ћелије до ћелије (међу свим типовима ћелија) добро до сјајног сати до дана добар
Изолована, перфузирана јетра од ћелије до ћелије (међу свим типовима ћелија) и унутар органа одличан време фер

 

Прецизно исечени комади ткива се више користе за токсиколошке студије. Доступни су нови инструменти који омогућавају истраживачу да сече уједначене резове ткива у стерилном окружењу. Резови ткива нуде одређену предност у односу на системе ћелијске културе јер су присутни сви типови ћелија органа и одржавају своју архитектуру ин виво и међућелијску комуникацију. Стога, ин витро студије могу да се спроведу да би се одредио тип циљне ћелије унутар органа, као и да се испита специфична токсичност за циљни орган. Недостатак резина је што се брзо дегенеришу након прва 24 сата културе, углавном због лоше дифузије кисеоника до ћелија у унутрашњости резова. Међутим, недавне студије су показале да се ефикаснија аерација може постићи благим окретањем. Ово, заједно са употребом сложенијег медијума, омогућава да кришке преживе до 96 сати.

Експлантати ткива су по концепту слични резовима ткива и такође се могу користити за одређивање токсичности хемикалија у одређеним циљним органима. Експлантати ткива се успостављају уклањањем малог комада ткива (за студије тератогености, нетакнути ембрион) и стављањем у културу ради даљег проучавања. Културе експлантата су биле корисне за краткорочне студије токсичности укључујући иритацију и корозивност коже, студије азбеста у трахеји и студије неуротоксичности у можданом ткиву.

Изоловани перфузирани органи се такође могу користити за процену токсичности циљног органа. Ови системи нуде предност сличну оној код резова ткива и експлантата у томе што су присутни сви типови ћелија, али без стреса на ткиво унетог манипулацијама укљученим у припрему резова. Поред тога, омогућавају одржавање интеракција унутар органа. Главни недостатак је њихова краткорочна одрживост, што ограничава њихову употребу за ин витро испитивање токсичности. У смислу служења као алтернатива, ове културе се могу сматрати префињеношћу јер животиње не доживљавају штетне последице ин виво третмана токсичним супстанцама. Међутим, њихова употреба не смањује значајно број потребних животиња.

Укратко, постоји неколико типова ин витро система доступних за процену токсичности циљног органа. Могуће је добити много информација о механизмима токсичности користећи једну или више ових техника. Потешкоћа остаје у знању како да се екстраполира из ин витро система, који представља релативно мали део токсиколошког процеса, на цео процес који се одвија ин виво.

Ин витро тестови за иритацију ока

Можда најспорнији тест токсичности за целе животиње из перспективе добробити животиња је Драизеов тест за иритацију очију, који се спроводи код зечева. У овом тесту, мала фиксна доза хемикалије ставља се у једно око зеца док се друго око користи као контрола. Степен иритације и упале се оцењује у различитим временима након излагања. Улажу се велики напори да се развију методологије које ће заменити овај тест, који је критикован не само из хуманих разлога, већ и због субјективности запажања и варијабилности резултата. Занимљиво је приметити да се упркос оштрим критикама које је Драизеов тест добио, показао да је изузетно успешан у предвиђању иритација људских очију, посебно благо до умерено иритирајућих супстанци, које је тешко идентификовати другим методама. Дакле, захтеви за ин витро алтернативама су велики.

Потрага за алтернативама Драизе тесту је компликована, иако се предвиђа да ће бити успешна. Бројне ин витро и друге алтернативе су развијене иу неким случајевима су спроведене. Алтернативе префињености Драизе тесту, које су по дефиницији мање болне или узнемирујуће за животиње, укључују тест малог волумена очију, у којем се мање количине тест материјала стављају у очи зечева, не само из хуманих разлога, већ и да би ближе опонашају количине којима људи могу бити случајно изложени. Још једно прецизирање је да се супстанце које имају пХ мањи од 2 или већи од 11.5 више не тестирају на животињама јер се зна да су јако иритантне за око.

Између 1980. и 1989. године, процењено је да је број зечева који се користе за тестирање козметике на иритацију очију за 87%. Ин витро тестови су укључени као део нивоа тестирања како би се дошло до овог огромног смањења у тестовима на целим животињама. Овај приступ је процес у више корака који почиње темељним испитивањем историјских података о иритацији ока и физичко-хемијском анализом хемикалије коју треба проценити. Ако ова два процеса не дају довољно информација, онда се врши батерија ин витро тестова. Додатни подаци добијени ин витро тестовима тада могу бити довољни за процену безбедности супстанце. Ако не, онда би последњи корак био извођење ограничених ин виво тестова. Лако је видети како овај приступ може елиминисати или бар драстично смањити број животиња потребних за предвиђање безбедности испитиване супстанце.

Батерија ин витро тестова која се користи као део ове стратегије нивоа тестирања зависи од потреба одређене индустрије. Тестирање иритације очију врши се у разним индустријама, од козметике преко фармацеутских производа до индустријских хемикалија. Врста информација које захтева свака индустрија варира и стога није могуће дефинисати једну батерију ин витро тестова. Тест батерија је генерално дизајнирана да процени пет параметара: цитотоксичност, промене у физиологији и биохемији ткива, квантитативни односи структуре и активности, медијатори упале и опоравак и поправка. Пример теста за цитотоксичност, који је један од могућих узрока иритације, је неутрални црвени тест који користи култивисане ћелије (види горе). Промене у ћелијској физиологији и биохемији које су резултат излагања хемикалијама могу се испитати у културама епителних ћелија рожњаче човека. Алтернативно, истраживачи су такође користили нетакнуте или сециране говеђе или пилеће очне јабучице добијене из кланица. Многе крајње тачке мерене у овим целим културама органа су исте као оне мерене ин виво, као што су замућеност рожњаче и отицање рожњаче.

Упала је често компонента хемикалије изазване повреде ока, а постоји низ тестова који су доступни за испитивање овог параметра. Различити биохемијски тестови откривају присуство медијатора који се ослобађају током инфламаторног процеса, као што су арахидонска киселина и цитокини. Хориоалантоична мембрана (ЦАМ) кокошијег јајета се такође може користити као индикатор упале. У ЦАМ тесту, мали комад љуске пилећег ембриона од десет до 14 дана се уклања да би се открио ЦАМ. Хемикалија се затим примењује на ЦАМ и знаци упале, као што је васкуларно крварење, се бележе у различитим временима након тога.

Један од најтежих ин виво процеса за процену ин витро је опоравак и поправка повреде ока. Новоразвијени инструмент, силицијумски микрофизиометар, мери мале промене у екстрацелуларном пХ и може се користити за праћење култивисаних ћелија у реалном времену. Показало се да ова анализа прилично добро корелира са ин виво опоравком и коришћена је као ин витро тест за овај процес. Ово је био кратак преглед типова тестова који се користе као алтернативе Драизе тесту за иритацију ока. Вероватно је да ће у наредних неколико година бити дефинисана комплетна серија ин витро тест батерија и свака ће бити валидирана за своју специфичну намену.

Валидација

Кључ за регулаторно прихватање и имплементацију методологија ин витро тестирања је валидација, процес којим се утврђује кредибилитет теста кандидата за одређену сврху. Напори да се дефинише и координише процес валидације учињени су иу Сједињеним Државама иу Европи. Европска унија је основала Европски центар за валидацију алтернативних метода (ЕЦВАМ) 1993. године да би координирала напоре тамо и радила у интеракцији са америчким организацијама као што је Џон Хопкинс центар за алтернативе тестирању на животињама (ЦААТ), академски центар у Сједињеним Државама. , и Међуагенцијски координациони комитет за валидацију алтернативних метода (ИЦЦВАМ), састављен од представника Националног института за здравље, Америчке агенције за заштиту животне средине, америчке Управе за храну и лекове и Комисије за безбедност потрошачких производа.

Валидација ин витро тестова захтева значајну организацију и планирање. Мора постојати консензус међу владиним регулаторима и индустријским и академским научницима о прихватљивим процедурама, као и довољан надзор од стране научног саветодавног одбора како би се осигурало да протоколи испуњавају постављене стандарде. Студије валидације треба да се изводе у низу референтних лабораторија користећи калибрисане сетове хемикалија из хемијске банке и ћелије или ткива из једног извора. И унутарлабораторијска поновљивост и међулабораторијска поновљивост теста кандидата морају се показати, а резултати подвргнути одговарајућој статистичкој анализи. Када се сакупе резултати различитих компоненти студија валидације, научни саветодавни одбор може дати препоруке о валидности тестова кандидата за одређену сврху. Поред тога, резултате студија треба објавити у рецензираним часописима и ставити у базу података.

Дефиниција процеса валидације је тренутно у току. Свака нова студија валидације ће пружити информације корисне за дизајн следеће студије. Међународна комуникација и сарадња су од суштинског значаја за брз развој широко прихватљивог низа протокола, посебно имајући у виду повећану хитност коју намеће усвајање Директиве ЕК о козметици. Ово законодавство може заиста пружити потребан подстицај за предузимање озбиљних напора за валидацију. Тек кроз завршетак овог процеса може почети прихватање ин витро метода од стране различитих регулаторних заједница.

Zakljucak

Овај чланак је пружио широк преглед тренутног статуса испитивања токсичности ин витро. Наука о ин витро токсикологији је релативно млада, али експоненцијално расте. Изазов за наредне године је да се механичко знање генерисано ћелијским и молекуларним студијама инкорпорира у огроман ин виво података како би се обезбедио потпунији опис токсиколошких механизама, као и да се успостави парадигма по којој се подаци ин витро могу користити за предвиђање токсичности ин виво. Инхерентна вредност ових ин витро метода ће бити остварена само кроз усаглашене напоре токсиколога и представника владе.

 

Назад

Читати 11509 пута Последњи пут измењено у петак, КСНУМКС септембар КСНУМКС КСНУМКС: КСНУМКС

" ОДРИЦАЊЕ ОД ОДГОВОРНОСТИ: МОР не преузима одговорност за садржај представљен на овом веб порталу који је представљен на било ком другом језику осим енглеског, који је језик који се користи за почетну производњу и рецензију оригиналног садржаја. Одређене статистике нису ажуриране од продукција 4. издања Енциклопедије (1998).“

Садржај

Токицологи Референцес

Андерсен, КЕ и ХИ Маибацх. 1985. Тестови за предвиђање контактне алергије на заморцима. Погл. 14 ин Актуелни проблеми у дерматологији. Базел: Каргер.

Асхби, Ј и РВ Теннант. 1991. Дефинитивни односи између хемијске структуре, канцерогености и мутагености за 301 хемикалију коју је тестирао амерички НТП. Мутат Рес КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Барлоу, С и Ф Саливан. 1982. Репродуктивне опасности индустријских хемикалија. Лондон: Ацадемиц Пресс.

Барретт, ЈЦ. 1993а. Механизми деловања познатих хуманих канцерогена. Ин Механизми карциногенезе у идентификацији ризика, уредили Х Ваинио, ПН Магее, ДБ МцГрегор и АЈ МцМицхаел. Лион: Међународна агенција за истраживање рака (ИАРЦ).

—. 1993б. Механизми вишестепене карциногенезе и процена ризика од карциногена. Енвирон Хеалтх Персп КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Бернстеин, МЕ. 1984. Средства која утичу на репродуктивни систем мушкараца: Ефекти структуре на активност. Друг Метаб Рев КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Беутлер, Е. 1992. Молекуларна биологија Г6ПД варијанти и других дефеката црвених крвних зрнаца. Анну Рев Мед КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Блоом, АД. 1981. Смернице за репродуктивне студије у изложеним људским популацијама. Вхите Плаинс, Њујорк: Фондација Марцх оф Димес.

Боргхофф, С, Б Схорт и Ј Свенберг. 1990. Биохемијски механизми и патобиологија а-2-глобулинске нефропатије. Анну Рев Пхармацол Токицол КСНУМКС: КСНУМКС.

Бурцхелл, Б, ДВ Неберт, ДР Нелсон, КВ Боцк, Т Иианаги, ПЛМ Јансен, Д Ланцет, ГЈ Мулдер, ЈР Цховдхури, Г Сиест, ТР Тепхли и ПИ Мацкензие. 1991. Суперфамилија гена УПД-глукуронозилтрансферазе: Предложена номенклатура заснована на еволуционој дивергенцији. ДНК Целл Биол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Бурлесон, Г, А Мунсон и Ј Деан. 1995. Савремене методе у имунотоксикологији. Њујорк: Вилеи.

Цапеццхи, М. 1994. Циљана замена гена. Сци Ам КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Царнеи, ЕВ. 1994. Интегрисана перспектива развојне токсичности етилен гликола. Реп Токицол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Деан, ЈХ, МИ Лустер, АЕ Мунсон и И Кимбер. 1994. Имунотоксикологија и имунофармакологија. Њујорк: Равен Пресс.

Десцотес, Ј. 1986. Имунотоксикологија лекова и хемикалија. Амстердам: Елсевиер.

Девари, И, Ц Росетте, ЈА ДиДонато, и М Карин. 1993. Активација НФкБ ултраљубичастом светлошћу не зависи од нуклеарног сигнала. Наука КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Дикон, РЛ. 1985. Репродуцтиве Токицологи. Њујорк: Равен Пресс.

Дуффус, ЈХ. 1993. Речник појмова који се користе у токсикологији за хемичаре. Пуре Аппл Цхем КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Елсенханс, Б, К Сцхуеманн и В Фортх. 1991. Токсични метали: интеракције са есенцијалним металима. У Исхрана, токсичност и рак, приредио ИР Ровланд. Боца-Ратон: ЦРЦ Пресс.

Агенција за заштиту животне средине (ЕПА). 1992. Смернице за процену изложености. Федерал Рег КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

—. 1993. Принципи процене ризика од неуротоксичности. Федерал Рег КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

—. 1994. Смернице за процену репродуктивне токсичности. Вашингтон, ДЦ: УС ЕПА: Канцеларија за истраживање и развој.

Фергуссон, ЈЕ. 1990. Тешки елементи. Погл. 15 ин Хемија, утицај на животну средину и ефекти на здравље. Оксфорд: Пергамон.

Гехринг, ПЈ, ПГ Ватанабе и ГЕ Блау. 1976. Фармакокинетичке студије у процени токсиколошке и еколошке опасности хемикалија. Нови концепти Саф Евал 1 (Део 1, Поглавље 8): 195-270.

Голдстеин, ЈА и СМФ де Мораис. 1994. Биохемија и молекуларна биологија човека ЦИП2Ц потпородица. Фармакогенетика КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Гонзалез, ФЈ. 1992. Хумани цитокроми П450: Проблеми и изгледи. Трендс Пхармацол Сци КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Гонзалез, ФЈ, ЦЛ Цреспи и ХВ Гелбоин. 1991. цДНК-експримирани хумани цитокром П450: Ново доба у молекуларној токсикологији и процјени ризика код људи. Мутат Рес КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Гонзалез, ФЈ и ДВ Неберт. 1990. Еволуција суперфамилије гена П450: “ратовање” између животиња и биљака, молекуларни погон и људске генетске разлике у оксидацији лекова. Трендс Генет КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Грант, ДМ. 1993. Молекуларна генетика Н-ацетилтрансфераза. Фармакогенетика КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Граи, ЛЕ, Ј Остби, Р Сигмон, Ј Феррел, Р Линдер, Р Цоопер, Ј Голдман и Ј Ласкеи. 1988. Развој протокола за процену репродуктивних ефеката токсиканата код пацова. Реп Токицол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Гуенгерицх, ФП. 1989. Полиморфизам цитокрома П450 код људи. Трендс Пхармацол Сци КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

—. 1993. Ензими цитокрома П450. Ам Сци КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Ханш, Ц и А Лео. 1979. Константе супституента за корелационе анализе у хемији и биологији. Њујорк: Вилеи.

Хансцх, Ц и Л Зханг. 1993. Квантитативни односи структуре и активности цитокрома П450. Друг Метаб Рев КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Хаиес АВ. 1988. Принципи и методе токсикологије. 2нд ед. Њујорк: Равен Пресс.

Хеинделл, ЈЈ и РЕ Цхапин. 1993. Методе у токсикологији: мушка и женска репродуктивна токсикологија. Вол. 1 и 2. Сан Дијего, Калифорнија: Ацадемиц Пресс.

Међународна агенција за истраживање рака (ИАРЦ). 1992. Сунчево и ултраљубичасто зрачење. Лион: ИАРЦ.

—. 1993. Професионална изложеност фризера и берберина и лична употреба боја за косу: неке боје за косу, козметичке боје, индустријске боје и ароматични амини. Лион: ИАРЦ.

—. 1994а. Преамбула. Лион: ИАРЦ.

—. 1994б. Неке индустријске хемикалије. Лион: ИАРЦ.

Међународна комисија за радиолошку заштиту (ИЦРП). 1965. године. Принципи мониторинга животне средине у вези са руковањем радиоактивним материјалима. Извештај Комитета ИВ Међународне комисије за радиолошку заштиту. Оксфорд: Пергамон.

Међународни програм о хемијској безбедности (ИПЦС). 1991. Принципи и методе за процену нефротоксичности повезане са излагањем хемикалијама, ЕХЦ 119. Женева: СЗО.

—. 1996. Принципи и методе за процену Директна имунотоксичност повезана са излагањем хемикалијама, ЕХЦ 180. Женева: СЗО.

Јохансон, Г и ПХ Наслунд. 1988. Програмирање табела - нови приступ у физиолошки заснованом моделирању токсикокинетике растварача. Токицол Леттерс КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Јохнсон, БЛ. 1978. Превенција неуротоксичних болести у радној популацији. Њујорк: Вилеи.

Јонес, ЈЦ, ЈМ Вард, У Мохр и РД Хунт. 1990. Хемопоетски систем, ИЛСИ монографија, Берлин: Спрингер Верлаг.

Калов, В. 1962. Фармокогенетика: наследство и одговор на лекове. Филаделфија: ВБ Саундерс.

—. 1992. Пхармоцогенетицс оф Друг Метаболисм. Њујорк: Пергамон.

Каммуллер, МЕ, Н Блоксма и В Сеинен. 1989. Аутоимуност и токсикологија. Имунска дисрегулација изазвана лековима и хемикалијама. Амстердам: Елсевиер Сциенцес.

Кавајири, К, Ј Ватанабе и СИ Хаиасхи. 1994. Генетски полиморфизам П450 и хуманог рака. Ин Цитохром П450: Биохемија, биофизика и молекуларна биологија, приредио МЦ Лехнер. Париз: Џон Либи Евротекст.

Кехрер, ​​ЈП. 1993. Слободни радикали као посредници оштећења и болести ткива. Црит Рев Токицол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Келлерман, Г, ЦР Схав и М Луитен-Келлерман. 1973. Индуцибилност арил хидрокарбонске хидроксилазе и бронхогени карцином. Нови Енгл Ј Мед КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Кхера, КС. 1991. Хемијски изазване промене хомеостазе мајке и хистологија концептуса: њихов етиолошки значај у феталним аномалијама пацова. Тератологија КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Киммел, ЦА, ГЛ Киммел и В Франкос. 1986. Радионица групе за међуагенцијску регулаторну везу о процени ризика од репродуктивне токсичности. Енвирон Хеалтх Персп КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Класен, ЦД, МО Амдур и Ј Доул (ур.). 1991. Казаретова и Доулова токсикологија. Њујорк: Пергамон Пресс.

Крамер, ХЈ, ЕЈХМ Јансен, МЈ Зеилмакер, ХЈ ван Кранен и ЕД Кроесе. 1995. Квантитативне методе у токсикологији за процену доза-одговор код људи. РИВМ-извештај бр. 659101004.

Кресс, С, Ц Суттер, ПТ Стрицкланд, Х Мукхтар, Ј Сцхвеизер и М Сцхварз. 1992. Карциноген-специфични мутациони образац у п53 гену у карциномима сквамозних ћелија коже миша изазваним ултраљубичастим Б зрачењем. Цанцер Рес КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Кревски, Д, Д Гаилор, М Сзиазковицз. 1991. Приступ екстраполацији малих доза без модела. Енв Х Перс КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Лавтон, МП, Т Црестеил, АА Елфарра, Е Ходгсон, Ј Озолс, РМ Пхилпот, АЕ Реттие, ДЕ Виллиамс, ЈР Цасхман, ЦТ Долпхин, РН Хинес, Т Кимура, ИР Пхиллипс, ЛЛ Поулсен, ЕА Схепхаре и ДМ Зиеглер. 1994. Номенклатура за фамилију гена монооксигеназе која садржи флавин код сисара заснована на идентитетима секвенци аминокиселина. Арцх Биоцхем Биопхис КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Левалтер, Ј и У Кораллус. 1985. Коњугати крвних протеина и ацетилација ароматичних амина. Нова сазнања о биолошком мониторингу. Инт Арцх Оццуп Енвирон Хеалтх КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Мајно, Г и ја Јорис. 1995. Апоптоза, онкоза и некроза: преглед ћелијске смрти. Ам Ј Патхол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Маттисон, ДР и ПЈ Тхомфорд. 1989. Механизам деловања репродуктивних токсиканата. Токицол Патхол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Меиер, УА. 1994. Полиморфизми цитокрома П450 ЦИП2Д6 као фактор ризика у карциногенези. У Цитохром П450: Биохемија, биофизика и молекуларна биологија, приредио МЦ Лехнер. Париз: Џон Либи Евротекст.

Моллер, Х, Х Ваинио и Е Хеселтине. 1994. Квантитативна процена и предвиђање ризика у Међународној агенцији за истраживање рака. Цанцер Рес 54:3625-3627.

Мооленаар, РЈ. 1994. Стандардне претпоставке у процени ризика од карциногена које користе регулаторне агенције. Регул Токицол Пхармацол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Мосер, ВЦ. 1990. Приступи скринингу неуротоксичности: функционална батерија за посматрање. Ј Ам Цолл Токицол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Национални истраживачки савет (НРЦ). 1983. Процена ризика у савезној влади: управљање процесом. Вашингтон, ДЦ: НАС Пресс.

—. 1989. Биолошки маркери у репродуктивној токсичности. Вашингтон, ДЦ: НАС Пресс.

—. 1992. Биолошки маркери у имунотоксикологији. Подкомитет за токсикологију. Вашингтон, ДЦ: НАС Пресс.

Неберт, ДВ. 1988. Гени који кодирају ензиме који метаболишу лекове: Могућа улога у болести код људи. Ин Фенотипске варијације у популацијама, уредили АД Воодхеад, МА Бендер и РЦ Леонард. Нев Иорк: Пленум Публисхинг.

—. 1994. Ензими који метаболишу лек у транскрипцији модулисаној лигандом. Биоцхем Пхармацол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Неберт, ДВ и ВВ Вебер. 1990. Пхармацогенетицс. Ин Принципи деловања лекова. Основе фармакологије, уредили ВБ Пратт и ПВ Таилор. Њујорк: Черчил-Ливингстон.

Неберт, ДВ и ДР Нелсон. 1991. Номенклатура гена П450 заснована на еволуцији. У Методе ензимологије. Цитохром П450, уредили МР Ватерман и ЕФ Јохнсон. Орландо, Флорида: Ацадемиц Пресс.

Неберт, ДВ и РА МцКиннон. 1994. Цитохром П450: Еволуција и функционална разноликост. Прог Лив Дис КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Неберт, ДВ, М Адесник, МЈ Цоон, РВ Естаброок, ФЈ Гонзалез, ФП Гуенгерицх, ИЦ Гунсалус, ЕФ Јохнсон, Б Кемпер, В Левин, ИР Пхиллипс, Р Сато и МР Ватерман. 1987. Суперфамилија гена П450: Препоручена номенклатура. ДНК Целл Биол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Неберт, ДВ, ДР Нелсон, МЈ Цоон, РВ Естаброок, Р. Феиереисен, И Фујии-Курииама, ФЈ Гонзалез, ФП Гуенгерицх, ИЦ Гунсалас, ЕФ Јохнсон, ЈЦ Лопер, Р Сато, МР Ватерман и ДЈ Вакман. 1991. Суперфамилија П450: ажурирање нових секвенци, мапирања гена и препоручене номенклатуре. ДНК Целл Биол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Неберт, ДВ, ДД Петерсен и А Пуга. 1991. Полиморфизам хуманог АХ локуса и рак: Индуцибилност ЦИП1А1 и других гена продуктима сагоревања и диоксином. Фармакогенетика КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Неберт, ДВ, А Пуга и В Василиоу. 1993. Улога Ах рецептора и диоксином индуцибилне [Ах] генске батерије у токсичности, канцеру и трансдукцији сигнала. Анн НИ Ацад Сци КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Нелсон, ДР, Т Каматаки, ДЈ Вакман, ФП Гуенгерицх, РВ Естаброок, Р Феиереисен, ФЈ Гонзалез, МЈ Цоон, ИЦ Гунсалус, О Готох, ДВ Неберт и К Окуда. 1993. Суперфамилија П450: ажурирање нових секвенци, мапирања гена, приступних бројева, раних тривијалних назива ензима и номенклатуре. ДНК Целл Биол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Ницхолсон, ДВ, А Алл, НА Тхорнберри, ЈП Ваилланцоурт, ЦК Динг, М Галлант, И Гареау, ПР Гриффин, М Лабелле, ИА Лазебник, НА Мандаи, СМ Рају, МЕ Смулсон, ТТ Иамин, ВЛ Иу и ДК Миллер. 1995. Идентификација и инхибиција ИЦЕ/ЦЕД-3 протеазе неопходне за апоптозу сисара. Природа КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Нолан, РЈ, ВТ Стотт и ПГ Ватанабе. 1995. Токсиколошки подаци у процени хемијске безбедности. Погл. 2 ин Патти'с Индустриал Хигиене анд Токицологи, уредили Љ Цраллеи, ЛВ Цраллеи и ЈС Бус. Њујорк: Џон Вили и синови.

Нордберг, ГФ. 1976. Ефекат и однос доза-одговор токсичних метала. Амстердам: Елсевиер.

Канцеларија за процену технологије (ОТА). 1985. Репродуктивне опасности на радном месту. Документ бр. ОТА-БА-266. Вашингтон, ДЦ: Државна штампарија.

—. 1990. Неуротоксичност: идентификација и контрола отрова нервног система. Документ бр. ОТА-БА-436. Вашингтон, ДЦ: Државна штампарија.

Организација за економску сарадњу и развој (ОЕЦД). 1993. УС ЕПА/ЕЦ Јоинт Пројецт Он тхе Евалуатион оф (Куантитативе) Струцтуре Ацтивити Релатионсхипс. Париз: ОЕЦД.

Парк, ЦН и НЦ Хавкинс. 1993. Преглед технологије; преглед процене ризика од рака. Токицол Метходс КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Пеасе, В, Ј Ванденберг и ВК Хоопер. 1991. Упоређивање алтернативних приступа успостављању регулаторних нивоа за репродуктивне токсичне супстанце: ДБЦП као студија случаја. Енвирон Хеалтх Персп КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Прпи ƒ -Маји ƒ , Д, С Телишман и С Кези ƒ . 6.5. Ин витро студија о интеракцији олова и алкохола и инхибицији дехидратазе еритроцита делта-аминолевулинске киселине код човека. Сцанд Ј Ворк Енвирон Хеалтх КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Реитз, РХ, РЈ Нолан и АМ Сцхуманн. 1987. Развој вишеврстних, вишеструких фармакокинетичких модела за метилен хлорид и 1,1,1-трихлоретан. Ин Фармакокинетика и процена ризика, вода за пиће и здравље. Васхингтон, ДЦ: Натионал Ацадеми Пресс.

Роитт, И, Ј Бростофф и Д Мале. 1989. Имунологија. Лондон: Говер Медицал Публисхинг.

Сато, А. 1991. Ефекат фактора средине на фармакокинетичко понашање пара органског растварача. Анн Оццуп Хиг КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Силбергелд, ЕК. 1990. Развијање формалних метода процене ризика за неуротоксичне супстанце: Процена стања технике. Ин Напредак неуробихејвиоралне токсикологије, уредили БЛ Јохнсон, ВК Ангер, А Дурао и Ц Ксинтарас. Цхелсеа, Мицх.: Левис.

Спенцер, ПС и ХХ Сцхаумберг. 1980. Експериментална и клиничка неуротоксикологија. Балтимор: Виллиамс & Вилкинс.

Свеенеи, АМ, МР Меиер, ЈХ Ааронс, ЈЛ Миллс и РЕ ЛеПорте. 1988. Евалуација метода за проспективну идентификацију раних феталних губитака у студијама епидемиологије животне средине. Ам Ј Епидемиол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Таилор, БА, ХЈ Хеинигер, анд Х Меиер. 1973. Генетичка анализа резистенције на оштећење тестиса изазвано кадмијумом код мишева. Проц Соц Екп Биол Мед КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Телишман, С. 1995. Интеракције есенцијалних и/или токсичних метала и металоида у погледу интериндивидуалних разлика у осетљивости на различите токсиканте и хроничне болести човека. Арх риг рада токсикол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Телишман, С, А Пинент, и Д Прпи ƒ -Маји ƒ . 6.5. Интерференција олова у метаболизму цинка и интеракција олова и цинка код људи као могуће објашњење очигледне индивидуалне осетљивости на олово. У Тешки метали у животној средини, уредили РЈ Аллан и ЈО Нриагу. Единбург: ЦЕП Цонсултантс.

Телишман, С, Д Прпи ƒ -Маји ƒ , и С Кези ƒ . 6.5. Ин виво студија о интеракцији олова и алкохола и инхибицији дехидратазе еритроцита делта-аминолевулинске киселине код човека. Сцанд Ј Ворк Енвирон Хеалтх КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Тилсон, ХА и ПА Цабе. 1978. Стратегије за процену неуробихејвиоралних последица фактора средине. Енвирон Хеалтх Персп КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Трамп, БФ и АУ Арстила. 1971. Повреда ћелије и смрт ћелије. Ин Принципи патобиологије, уредили МФ ЛаВиа и РБ Хилл Јр. Нев Иорк: Окфорд Унив. Притисните.

Трамп, БФ и ИК Березески. 1992. Улога цитосолног Ца2 + код повреде ћелија, некрозе и апоптозе. Цурр Опин Целл Биол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

—. 1995. Повреда ћелија посредована калцијумом и ћелијска смрт. ФАСЕБ Ј КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Трамп, БФ, ИК Березески и А Осорнио-Варгас. 1981. Ћелијска смрт и процес болести. Улога ћелијског калцијума. У Ћелијска смрт у биологији и патологији, уредили ИД Бовен и РА Лоцксхин. Лондон: Цхапман & Халл.

Вос, ЈГ, М Иоунес и Е Смитх. 1995. Алергијска преосетљивост изазвана хемикалијама: Препоруке за превенцију објављене у име Регионалне канцеларије Светске здравствене организације за Европу. Боца Ратон, ФЛ: ЦРЦ Пресс.

Вебер, ВВ. 1987. Гени ацетилатора и одговор на лекове. Њујорк: Окфорд Унив. Притисните.

Светска здравствена организација (СЗО). 1980. Препоручена ограничења на основу здравља у професионалној изложености тешким металима. Серија техничких извештаја, бр. 647. Женева: СЗО.

—. 1986. Принципи и методе за процену неуротоксичности повезане са излагањем хемикалијама. Критеријуми здравља животне средине, бр.60. Женева: СЗО.

—. 1987. Смернице за квалитет ваздуха за Европу. Еуропеан Сериес, Но. 23. Копенхаген: Регионалне публикације СЗО.

—. 1989. Речник појмова о хемијској безбедности за употребу у ИПЦС публикацијама. Женева: СЗО.

—. 1993. Извођење водећих вредности за границе изложености засноване на здрављу. Критеријуми здравља животне средине, необрађени нацрт. Женева: СЗО.

Виллие, АХ, ЈФР Керр и АР Цуррие. 1980. Ћелијска смрт: значај апоптозе. Инт Рев Цитол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

@РЕФС ЛАБЕЛ = Остала релевантна очитавања

Алберт, РЕ. 1994. Процена ризика од карциногена у Агенцији за заштиту животне средине САД. Црит. Рев. Токицол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Албертс, Б, Д Браи, Ј Левис, М Рафф, К Робертс и ЈД Ватсон. 1988. Молекуларна биологија ћелије. Нев Иорк: Гарланд Публисхинг.

Ариенс, ЕЈ. 1964. Молецулар Пхармацологи. Вол.1. Нев Иорк: Ацадемиц Пресс.

Ариенс, ЕЈ, Е Мутсцхлер и АМ Симонис. 1978. Аллгемеине Токицологие [Општа токсикологија]. Штутгарт: Георг Тхиеме Верлаг.

Асхби, Ј и РВ Теннант. 1994. Предвиђање карциногености глодара за 44 хемикалије: резултати. Мутагенеза КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Асхфорд, НА, ЦЈ Спадафор, ДБ Хаттис и ЦЦ Цалдарт. 1990. Праћење радника због изложености и болести. Балтимор: Јохнс Хопкинс Унив. Притисните.

Балабуха, НС и ГЕ Фрадкин. 1958. Накопление радиоактивних елементов в организме И их виведение. Москва: Медгиз.

Баллс, М, Ј Бридгес и Ј Соутхее. 1991. Животиње и алтернативе у токсикологији садашњи статус и будући изгледи. Нотингем, УК: Фонд за замену животиња у медицинским експериментима.

Берлин, А, Ј Деан, МХ Драпер, ЕМБ Смитх и Ф Спреафицо. 1987. Иммунотокицологи. Дордрехт: Мартинус Најхоф.

Боихоус, А. 1974. Дишу. Њујорк: Грун & Стратон.

Брандау, Р и БХ Липполд. 1982. Дермална и трансдермална апсорпција. Штутгарт: Виссенсцхафтлицхе Верлагсгеселлсцхафт.

Брусицк, ДЈ. 1994. Методе за процену генетског ризика. Боца Ратон: Левис Публисхерс.

Буррелл, Р. 1993. Хумана имунолошка токсичност. Мол Аспецтс Мед КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Цастелл, ЈВ и МЈ Гомез-Лецхон. 1992. Ин витро алтернативе животињској фармако-токсикологији. Мадрид, Шпанија: Фармаиндустриа.

Цхапман, Г. 1967. Телесне течности и њихове функције. Лондон: Едвард Арнолд.

Комисија за биолошке маркере Националног истраживачког савета. 1987. Биолошки маркери у истраживању здравља животне средине. Енвирон Хеалтх Персп КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Цраллеи, Љ, ЛВ Цраллеи и ЈС Бус (ур.). 1978. Патти'с Индустриал Хигиене анд Токицологи. Њујорк: Витеи.

Даиан, АД, РФ Хертел, Е Хеселтине, Г Казантис, ЕМ Смитх и МТ Ван дер Венне. 1990. Имунотоксичност метала и имунотоксикологија. Нев Иорк: Пленум Пресс.

Ђурић, Д. 1987. Молекуларно-ћелијски аспекти професионалне изложености токсичним хемикалијама. Ин Део 1 Токсикокинетика. Женева: СЗО.

Дуффус, ЈХ. 1980. Енвиронментал Токицологи. Лондон: Едвард Арнолд.

ЕЦОТОЦ. 1986. Однос структуре и активности у токсикологији и екотоксикологији, Монографија бр.8. Брисел: ЕЦОТОЦ.

Фортх, В, Д Хенсцхлер и В Руммел. 1983. Пхармакологие унд Токикологие. Манхајм: Библио- грапхисцхе Институт.

Фразиер, ЈМ. 1990. Научни критеријуми за валидацију ин витро токсичности тестова. ОЕЦД Монографија о животној средини, бр. 36. Париз: ОЕЦД.

—. 1992. Ин витро токсичност—примена за процену безбедности. Њујорк: Марсел Декер.

Гад, СЦ. 1994. Ин витро токсикологија. Њујорк: Равен Пресс.

Гадаскина, ИД. 1970. Зхирораиа ткан И иади [Масна ткива и токсиканти]. Ин Актуални проблеми у професионалној токсикологији, приредио НВ Лазарев. Лењинград: Министарство здравља РСФСР.

Гаилор, ДВ. 1983. Употреба фактора сигурности за контролу ризика. Ј Токицол Енвирон Хеалтх КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Гибсон, ГГ, Р Хуббард и ДВ Парке. 1983. Иммунотокицологи. Лондон: Ацадемиц Пресс.

Голдберг, АМ. 1983-1995. Алтернативе ин Токицологи. Вол. 1-12. Њујорк: Мери Ен Либерт.

Грандјеан, П. 1992. Индивидуална осетљивост на токсичност. Токицол Леттерс КСНУМКС / КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Ханке, Ј и ЈК Пиотровски. 1984. Биоцхемицзне подстави токсикологии [Биохемијске основе токсикологије]. Варшава: ПЗВЛ.

Хатцх, Т и П бруто. 1954. године. Плућно таложење и задржавање инхалираних аеросола. Нев Иорк: Ацадемиц Пресс.

Здравствени савет Холандије: Комитет за процену карциногености хемијских супстанци. 1994. Процена ризика од канцерогених хемикалија у Холандији. Регул Токицол Пхармацол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Холандија, ВЦ, РЛ Клајн и АХ Бригс. 1967. Молекулаере Пхармакологие.

Хуфф, ЈЕ. 1993. Хемикалије и рак код људи: Први докази код експерименталних животиња. Енвирон Хеалтх Персп КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Класен, ЦД и ДЛ Еатон. 1991. Принципи токсикологије. Погл. 2 ин Казаретова и Доулова токсикологија, уредник ЦД Клаасен, МО Амдур и Ј Доул. Њујорк: Пергамон Пресс.

Коссовер, ЕМ. 1962. године. Молецулар Биоцхемистри. Нев Иорк: МцГрав-Хилл.

Кундиев, ИИ. 1975. године.Вссавание пестицидов цхерез козсу И профилактика отравлении [Апсорпција пестицида кроз кожу и превенција интоксикације]. Кијев: Здоровиа.

Кустов, ВВ, ЛА Тиунов, и ЈА Васиљев. 1975. године. Комвинование деиствие промисхлених иадов [Комбиновани ефекти индустријских токсиканата]. Москва: Медицина.

Лауверис, Р. 1982. Токицологие индустриелле ет интокицатионс профессионеллес. Парис: Массон.

Ли, АП и РХ Хефлицх. 1991. Генетиц Токицологи. Боца Ратон: ЦРЦ Пресс.

Лоевеи, АГ и П Сиекевитз. 1969. Структура и функције ћелије. Њујорк: Холт, Рајнхарт и Винстон.

Лоомис, ТА. 1976. Ессентиалс оф Токицологи. Филаделфија: Леа & Фебигер.

Менделсон, МЛ и РЈ Албертини. 1990. Мутација и животна средина, делови АЕ. Њујорк: Вилеи Лисс.

Метзлер, ДЕ. 1977. Биохемија. Нев Иорк: Ацадемиц Пресс.

Миллер, К, ЈЛ Турк, анд С Ницклин. 1992. Принципи и пракса имунотоксикологије. Оксфорд: Блацквеллс Сциентифиц.

Министарство за међународну трговину и индустрију. 1981. Приручник о постојећим хемијским супстанцама. Токио: Цхемицал Даили Пресс.

—. 1987. Захтев за одобрење хемикалија по Закону о контроли хемијских супстанци. (на јапанском и енглеском). Токио: Кагаку Когио Ниппо Пресс.

Монтагна, В. 1956. Структура и функција коже. Нев Иорк: Ацадемиц Пресс.

Мооленаар, РЈ. 1994. Процена ризика од карциногена: међународно поређење. Регул Токицол Пхармацол КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Национални истраживачки савет. 1989. Биолошки маркери у репродуктивној токсичности. Вашингтон, ДЦ: НАС Пресс.

Неуман, ВГ и М Неуман. 1958. Хемијска динамика коштаних минерала. Чикаго: Унив. часописа Цхицаго Пресс.

Невцомбе, ДС, НР Росе и ЈЦ Блоом. 1992. Цлиницал Иммунотокицологи. Њујорк: Равен Пресс.

Пацхецо, Х. 1973. Ла пхармацологие молецулаире. Париз: Прессе Университаире.

Пиотровски, ЈК. 1971. Примена метаболичке и екскреторне кинетике на проблеме индустријске токсикологије. Вашингтон, ДЦ: Министарство здравља, образовања и социјалне заштите САД.

—. 1983. Биохемијске интеракције тешких метала: Металотионеин. Ин Здравствени ефекти комбинованог излагања хемикалијама. Копенхаген: Регионална канцеларија СЗО за Европу.

Процеедингс оф Арнолд О. Бецкман/ИФЦЦ Цонференце оф Енвиронментал Токицологи Биомаркерс оф Цхемицал Екпосуре. 1994. Цлин Цхем 40(7Б).

Русселл, ВМС и РЛ Бурцх. 1959. године. Принципи хумане експерименталне технике. Лондон: Метхуен & Цо. Прештампано од стране Универзитетске федерације за добробит животиња, 1993.

Рицрофт, РЈГ, Т Менне, ПЈ Фросцх и Ц Бенезра. 1992. Уџбеник контактног дерматитиса. Берлин: Спрингер-Верлаг.

Сцхуберт, Ј. 1951. Процена радиоелемената код изложених особа. Нуклеоника КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Схелби, МД и Е Зеигер. 1990. Активност хуманих канцерогена у тестовима цитогенетике салмонеле и коштане сржи глодара. Мутат Рес КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Стоне, Р. 1995. Молекуларни приступ ризику од рака. Наука КСНУМКС: КСНУМКС-КСНУМКС.

Теисингер, Ј. 1984. Екпоситионтест ин дер Индустриетокикологие [Тестови изложености у индустријској токсикологији]. Берлин: ВЕБ Верлаг Волк унд Гесундхеит.

амерички конгрес. 1990. Генетски мониторинг и скрининг на радном месту, ОТА-БА-455. Вашингтон, ДЦ: Штампарија владе САД.

ВЕБ. 1981. Клеине Ензиклопаедие: Лебен [Живот]. Лајпциг: ВЕБ Библиограпхисцхе Институт.

Веил, Е. 1975. Елементс де токицологие индустриелле [Елементи индустријске токсикологије]. Париз: Массон ет Цие.

Светска здравствена организација (СЗО). 1975. Методе коришћене у СССР-у за утврђивање безбедних нивоа токсичних супстанци. Женева: СЗО.

КСНУМКС. Принципи и методе за процену токсичности хемикалија, 1. део. Критеријуми здравља животне средине, бр.6. Женева: СЗО.

—. 1981. Комбинована изложеност хемикалијама, привремени документ бр.11. Копенхаген: Регионална канцеларија СЗО за Европу.

—. 1986. Принципи токсикокинетичких студија. Критеријуми здравља животне средине, бр. 57. Женева: СЗО.

Иофтреи, ЈМ и ФЦ Цоуртице. 1956. године. Лимфатика, лимфа и лимфоидно ткиво. Цамбридге: Харвард Унив. Притисните.

Закутинскии, ДИ. 1959. године. Проблеми токсикологије радиоактивних материја. Москва: Медгиз.

Зурло, Ј, Д Рудацилле и АМ Голдберг. 1993. Животиње и алтернативе у тестирању: историја, наука и етика. Њујорк: Мери Ен Либерт.